프로바이오틱스는 건강기능식품으로 인정받기 위해서는 건강기능식품 공전의 규격을 충족해야 합니다. 프로바이오틱스 규격에는 일정량 이상의 생균이 함유되어 있어야 하는데요. 프로바이오틱스 규격함유된 생균수를 산정하는 시험방법에 대해 알려드리겠습니다.

 

유산균수 비피더스균수 측정 시험방법 (MRS BL BCP TOS-MUP 배지) 포스팅의 목차는 다음과 같습니다.

 

1. 프로바이오틱스 규격

2. 유산균수 산정 시험방법

3. 유산간균 및 구균수 시험방법

4. 비피더스균수 산정 시험방법

 

1. 프로바이오틱스 규격

프로바이오틱스는 살아있는 상태여야지만 장 건강을 비롯한 여러 효능을 나타낼 수 있습니다. 건강기능식품 공전 상에는 생균을 1g당 1억 CFU 이상 함유해야 한다고 명시하고 있어요. 물론 제품에 표시된 생균수보다 많은 양의 프로바이오틱스 균주가 검출되어야 합니다. 그리고 고유의 색택과 향미를 가지며 이미, 이취가 없어야 합니다. 대장균군이 검출이 되어서도 안됩니다.

 

살아있는 프로바이오틱스 수를 어떻게 셀 수 있을까요? 프로바이오틱스 균주는 잘 자라고 다른 오염 균주들은 잘 자라지 못하는 선택 배지에서 시료 속의 프로바이오틱스 균주들을 배양하게 됩니다. 평판배지에서는 프로바이오틱스 균주들이 집락을 형성하는데 이 집락을 세는 방법을 사용하고 있습니다. 아래 링크를 참고하시면 평판배지에서 프로바이오틱스 집락을 세는 방법에 대해 자세히 아실 수 있으실 거예요.

 

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2. 유산균수 산정 시험방법

건강기능식품 공전에서는 유산균수를 세는 시험방법을 정해놓고 있습니다. MRS 배지 또는 BL 배지를 사용하여 배양 후 유산균의 집락을 계수합니다. 배양을 할 때는 산소가 없는 혐기 조건에서 48~72시간 정도 집락을 형성 시킵니다.

 

MRS배지

MRS 배지는 개발자인 de Man, Rogosa, Sharpe 의 앞 철자를 조합하여 이름을 만들었어요. MRS 배지는 5.7의 낮은 pHSodium Acetate 성분이 다른 균주가 자라는 것을 방해하여 유산균만 잘 자랄 수 있도록 도와줍니다. 유산균 외에 비피더스균도 MRS 배지에서 생장할 수 있습니다.

 

MRS 배지 agar
출처: Millipore

 

MRS 배지의 조성은 다음과 같습니다.


Enzyme Digest of Casein 10 g, Meat Extract 10 g, Yeast Extract 4 g, Glucose 20 g, Polysorbate 80(Tween 80), Triammonium Citrate 2 g, Sodium Acetate 5 g, Magnesium Sulfate 7H2O 0.2 g, Manganese Sulfate 4H2O 0.05 g, Dipotassium hydrogen Phosphate 2 g, Agar 15 g을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH를 5.7±0.1로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균.


 

BL배지

BL 배지는 glucose Blood Liver 배지의 줄임말입니다. BL 배지에는 특이하게도 이름에서 알 수 있듯이 소, 말 또는 양의 혈액이 내용물로 들어갑니다. 비피더스균도 잘 자라기 때문에 프로바이오틱스 유산균수를 셀 때 이용됩니다.

 

BL 배지의 조성은 다음과 같습니다.


Beef Extract 3 g, Liver Extract 5 g, Yeast Extract 5 g, Proteose Peptone 10 g, Tryptone 5 g, Soypeptone 3 g, Soluble Starch 0.5 g, Glucose 10 g, Dipotassium Phosphate 1 g, Monopotassium Phosphate 1 g, Magnesium Sulfate 0.2g, Sodium Chloride 0.01g, Manganese Sulfate 0.00674 g, L-Cysteine‧HCl‧H2O 0.5 g, Ferrous Sulfate 0.01 g, Polysorbate 80(Tween 80) 1 g, Agar 15 g을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH를 7.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여, 50℃로 냉각 후 소, 말, 양 또는 사람의 탈섬유소 혈액을 5%가 되도록 첨가.


 

 

3. 유산간균 및 구균수 시험방법

유산간균과 구균만을 구분하여 계수를 할 수도 있습니다. BCP (Bromcresol Purple) 첨가 평판 측정용 배지를 사용합니다. BCP는 염기성에서는 보라색을 띠다가 산성이 되면 노란색으로 바뀌게 됩니다. 유산간균, 구균은 생장하면서 산성의 젖산을 만들어 내기 때문에 집락 주위가 노란색으로 변하게 되죠. 그리고 유산간균과 구균은 산소가 있거나 없는 조건 모두에서 자랄 수 있기 때문에 혐기 외에 호기 조건에서도 48~72시간 정도 배양한 후 균수를 측정할 수 있습니다.

 

BCP 첨가 평판 측정용 배지의 조성은 다음과 같습니다.


Yeast extract 2.5 g, Peptone 5.0 g, Dextrose 1.0 g, Polysorbate 80(Tween 80) 1.0 g, L-Cysteine 0.1 g, Agar 15.0 g 을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 6.8~7.0으로 조정한 후 BCP (Bromcresol purple)을 0.004~0.006%가 되도록 가한 후 121℃에서 15분간 멸균.


 

4. 비피더스균수 산정 시험방법

비피더스균은 TOS-MUP 배지를 사용하여 선별적으로 계수를 할 수 있습니다. TOS-MUP는 Transgalcto Oligosaccharides-Mupirocin 의 줄임말입니다. TOS는 비피더스균만 특이적으로 이용하여 생장할 수 있는 성분이에요. 그리고 mupirocin은 항생제 성분인데 비피더스균은 mupirocin이 있는 환경에서도 살아남을 수 있는 특성을 가지고 있죠. 이러한 TOS와 mupirocin을 이용하여 비피더스균만 선택적으로 배양이 가능하게 됩니다. 혐기 조건에서 48~72시간 정도 배양하게 됩니다.

 

TOP-MUP 배지의 조성은 다음과 같습니다.


Trypticase peptone 10 g, Yeast extract 1 g, KH2PO4 3 g, K2HPO4 4.8 g, (NH4)2SO4 3 g, Magnesium sulfate 7H2O 0.2 g, (R)-Cysteine-HCL·H2O 0.5 g, Sodium propionate 15 g, TOS(Galactooligosaccharide) 10 g, Agar 15 g를 증류수 950 mL에 녹이고 pH를 6.3±0.2로 조정한 후 115℃ 에서 15분간 멸균하여 50℃정도로 식힌 다음 MUP(mupirocin) supplement(1 mg/mL)를 주사필터(0.22 ㎛)한 후 50 mL을 위의 배지에 첨가.


 

지금까지 유산균수 비피더스균수 측정 시험방법에 대해 알려드렸습니다.

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    하루건강

    오늘도 포스팅 잘 보고 갑니다 ㅎㅎ
    좋은 하루 보내세요~~!

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    스토리퀸

    유산균의 정보는 정말 끝이 없는듯 싶어요! 그래도 읽다보면 재밌다는^^

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    신상계란

    매번 느끼지만 유산균 전문가!! ㅎㅎ 배울게 끝이 없네요 ㅎㅎ

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    꿈나무 Riha★

    어렵지만 우리 몸에 필요한것 같아요 유산균 전문지식도 보니 좋네요~^^

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    신선의 즐거운세상

    안녕하세요 잘 보고 갑니다😁

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    물파도

    2~3일 배양해야해서 측정하는군요
    잘보고 갑니다

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    청산사랑

    포스팅 잘보고갑니다

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    Anna-bless

    유산균 전문가!! 믿고 늘 제품 정보 얻어갑니다

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    진욱이 일상

    잘보고갑니당!

  11. thumbnail
    @#$%&!

    그냥 실험은 유산균 전문가님에게 맡기고 저는 보기만 할래요 ㅋㅋㅋ

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    i군

    잘보고가요!

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    우주네가장

    유산균 전문가님!!! 오늘도 하나 배워갑니다.

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    민이멀

    우왛 오늘은 뭔가 더 심도있어요 ㅎㅎㅎ

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    RunKing

    어휴 공부하시는분이라 확실히 무서운 전문용어쓰시는거 멋지십니다 ㅎㅎ

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    뿌리 깊은 순두부

    푸딩님 네이처락 포스트 바이오틱스도 리뷰해주세요!!

  17. thumbnail
    익잉

    잘 보고 갑니당 ✋

  18. thumbnail
    헤일로

    비피더스가 그냥 요구르트 이름인줄 알았는데 균 이름이었군요!

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    럭셔리크로우

    원래 MRS가 그본이죠! 대학때 실험실에서 겁나게 만들었어요. ^^;; 복숭푸딩님 즐거운 점심시간 보내세요 ~^^

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    H_A_N_S

    유산균 먹으면 확실히 아침 그 빛깔이 황금색인 거 같아요ㅎㅎㅎ

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    2021.08.09 17:26

    비밀댓글입니다